Электрофорез
Страница 2

. Префорез. Перед нанесением проб на гель проводили префорез при постоянной силе тока 100 мА в течнение 30 минут.

. Нанесение проб на гель. Во избежание искривления дорожек пробы желательно не наносить в самые крайние слоты.

ПЦР-пробу смешивали с красителем в соотношении примерно 2:0,5, отбирали от общего объёма 15 мкл и вносили в слот.

. Электрофорез. Режим электрофореза - постоянная сила тока 55-70 мА. Процесс прекращали, когда расстояние от дна слот до середины полосы красителя составит не менее 13 см.

. Окраска и отмывка геля. После отключения от источника питания сливали

-кратный ТВЕ, камеру разбирали, гель помещали в поддон с 0,5 л дистиллированной воды (можно оставить гель на нижнем стекле для удобства его перемещения). Добавляли 20 мкл 10 мкг/мл раствора бромистого этидия. Окрашивали гель в течение 30 минут на шейкере. Затем отмывали гель дистиллированной водой в течение 30 минут на шейкере.

После разделения фракции ДНК визуализировали по интенсивности флуоресценции в ультрафиолетовом свете в присутствии бромистого этидия. Получали электрофореграммы, которые позволяют визуализировать исследуемые микросателлитные локусы. Каждому бэнду (тёмной полосе) на электрофореграмме соответствует аллель определённой длины. Аллели разной длины в электрическом поле двигаются с разной скоростью, поэтому на электрофореграмме темные полосы располагаются на разных уровнях: ниже расположены короткие аллели, выше располагаются более длинные аллели. Толщина бенда зависит от количества ДНК в пробе. Аллели одинаковой длины будут располагаться на одном и том же уровне, поэтому толщина бенда увеличивается. Это будет свидетельствовать о гомозиготности исследуемой особи по определённому локусу.

Результаты исследований

Страницы: 1 2 

Смотрите также

Влияние физических факторов на фенотипические свойства микроорганизмов
Введение Вплоть до конца прошлого века микробиология развивалась главным образом на основе исследований чистых культур микроорганизмов,у которых были изучены фенотипические свойства. ...

Лютеинизирующий и фолликулостимулирующий гормоны. Физиологическая роль и механизмы регуляции
Введение В последнее время были выявлены новые особенности работы гонадотрофов передней доли гипофиза, касающиеся различных механизмов продукции и секреции лютеинизирующего (ЛГ) и фол ...

Физиология человека и животных
...

 
 




Copyright © 2013 - Все права защищены - www.biotheory.ru