Электрофорез

Учебные материалы по биологии / Использование микросателлитного анализа ДНК для изучения популяций кумжи (Salmo Trutta L.) в реках Абхазии / Электрофорез

Страница 2

. Префорез. Перед нанесением проб на гель проводили префорез при постоянной силе тока 100 мА в течнение 30 минут.

. Нанесение проб на гель. Во избежание искривления дорожек пробы желательно не наносить в самые крайние слоты.

ПЦР-пробу смешивали с красителем в соотношении примерно 2:0,5, отбирали от общего объёма 15 мкл и вносили в слот.

. Электрофорез. Режим электрофореза - постоянная сила тока 55-70 мА. Процесс прекращали, когда расстояние от дна слот до середины полосы красителя составит не менее 13 см.

. Окраска и отмывка геля. После отключения от источника питания сливали

-кратный ТВЕ, камеру разбирали, гель помещали в поддон с 0,5 л дистиллированной воды (можно оставить гель на нижнем стекле для удобства его перемещения). Добавляли 20 мкл 10 мкг/мл раствора бромистого этидия. Окрашивали гель в течение 30 минут на шейкере. Затем отмывали гель дистиллированной водой в течение 30 минут на шейкере.

После разделения фракции ДНК визуализировали по интенсивности флуоресценции в ультрафиолетовом свете в присутствии бромистого этидия. Получали электрофореграммы, которые позволяют визуализировать исследуемые микросателлитные локусы. Каждому бэнду (тёмной полосе) на электрофореграмме соответствует аллель определённой длины. Аллели разной длины в электрическом поле двигаются с разной скоростью, поэтому на электрофореграмме темные полосы располагаются на разных уровнях: ниже расположены короткие аллели, выше располагаются более длинные аллели. Толщина бенда зависит от количества ДНК в пробе. Аллели одинаковой длины будут располагаться на одном и том же уровне, поэтому толщина бенда увеличивается. Это будет свидетельствовать о гомозиготности исследуемой особи по определённому локусу.

Результаты исследований