Титрование сывороток крови полиэтиленгликолями

Учебные материалы по биологии / Использование дифракционных методов для анализа структуры, фракционного состава и равновесных взаимодействий биологических макромолекул / Титрование сывороток крови полиэтиленгликолями

Для титрования и анализа модифицированных ЛП методом МУРР предварительно в сыворотки и плазмы крови добавляли растворы ПЭГ до необходимой концентрации, после чего эти смеси инкубировали при 8оС в течение 18 ч [1, 2]. Осадки отделяли центрифугированием (центрифуга Т-51, Германия) при 6000 об/мин в течение 30 мин. Для растворения осажденных иммунных комплексов к осадку добавляли физиологический раствор (pH 7,4) в объеме исходной сыворотки [3]. Окончательную диссоциацию иммунных комплексов, включающих и модифицированные ЛП, проводили путем добавления сухого NaNO3, используемого в качестве контрастера.

При титровании сывороток крови ПЭГ методом светорассеяния пластмассовую или стеклянную цилиндрическую кювету заполняли буферной смесью (физиологический раствор, 750 мкл, pH 7,4). Далее добавляли 100 мкл сыворотки и тщательно перемешивали, после чего производили титрование растворами ПЭГ по 5 или 10 мкл вплоть до достижения запланированных конечных концентраций. При каждой концентрации ПЭГ производили измерение интенсивностей рассеянного света (по четырем точкам углов рассеяния). Из полученных данных с использованием специальной программы вычислялись средние значения радиусов инерции (Rg) образованных комплексов «ПЭГ - белки», а также значения интенсивностей светорассеяния в нулевом угле (I(0)) [14, 15].

3. Результаты