Методы определения жизнеспособности клеток

Учебные материалы по биологии / Идентификация микроводорослей Euglena glacilis и анализ их чувствительности к ингибирующим веществам / Методы определения жизнеспособности клеток

Для анализа жизнедеятельности микроорганизмов используются термограммы. Различают дифференциальную и интегральную термограммы.

Под дифференциальной термограммой понимают зависимость мощности тепловыделении образца от времени наблюдения.

Интегральная термограмма отражает общее количество тепла, выделенного к определенному моменту, как функцию времени. Микрокалориметр непосредственно регистрирует дифференциальную термограмму, и затем рассчитывается интегральная термограмма.

Тепловыделение может быть обусловлено физико-химическими, биохимическими, микробиологическими процессами. В последнем случае термограмма отражает энергетический обмен микроорганизмов с окружающей средой в процессе жизненного цикла популяции клеток.

Так как различные процессы жизнедеятельности микроорганизмов сопровождаются выделением тепла, то мерой физиологической активности клеток с энергетической точки зрения может являться скорость их тепловыделения, которая отражает как интенсивность протекающих метаболических реакций, так и скорость размножения клеток.

В основе биокалориметрии, как и других косвенных инструментальных методов анализа живых организмов, лежит зависимость величины регистрируемого сигнала от численности и физиологической активности клеток в анализируемом объекте.

Для характеристики тепловыделения отдельного вида микроорганизмов может быть использована величина удельной теплопродукции клеток [16]:

, (35)

где qi - мощность тепловыделения клеток i-го вида;

Ni - количество клеток i-го вида [16].

Перед тем как приступить к работе с прибором, его необходимо прогреть в течение 1ч. После чего установив параметры, необходимые для измерения можно приступить к измерениям. К прибору прилагаются две микрокюветы объемом 1 мл, которые заполняются раствором сравнения (дистиллированная вода) и суспензией, изучаемых микроорганизмов. Суспензию микроорганизмов готовят следующим образом: к полученной чистой культуре приливают физраствор. Медленно, круговыми движениями перемешиваем. Затем отбираем 0,5 мл и переливаем в микрокувету на 1 мл. В эту же кювету помещаем 0,5 мл среды Лозино-Лозинского. В другую кювету помещаем дистиллированную воду. Заполненные микрокюветы помещают в микрокалориметр и проводят измерения.

Результаты и их обсуждение