Методы конструирования рекомбинантных ДНК in vitro
Учебные материалы по биологии / Генная инженерия / Методы конструирования рекомбинантных ДНК in vitro
Страница 2

По такой схеме могут быть ковалентно соединены in vitro два и более любых фрагмента, полученных при гидролизе молекул ДНК одной и той же рестриктазой. Однако в первоначальном виде метод имеет существенное ограничение, связанное с тем, что с помощью рестриктаз (особенно одного фермента) в каждом конкретном случае можно получить лишь специфический, строго определенный набор фрагментов изучаемой ДНК. Для преодоления этого недостатка была разработана модификация, основанная на использовании линкерных молекул (линкеров) - синтетических сегментов ДНК, содержащих в своем составе последовательности, узнаваемые рестриктазами. Метод предложили Р. Шеллер с сотрудниками в 1977 г. Он позволяет достаточно просто рекомбинировать in vitro практически любые фрагменты ДНК.

Модификация рестриктазно-лигазного метода с использованием линкеров. Разработанный подход включает следущие операции (рис. 3):

1) по тупым или липким концам фрагмента ДНК, который предполагается рекомбинировать, с помощью лигазы фага Т4 пришивают короткие синтетические двухцепочечные сегменты, имеющие участки узнавания определенной рестриктазы;

2) полученный фрагмент обрабатывают выбранной рестриктазой, в результате чего образуются липкие концы;

) полученный фрагмент рекомбинируют in vitro с другими молекулами ДНК по обычной схеме рестриктазно-лигазного метода.

Рис. 3. Схема создания рекомбинантных ДНК с использованием линкерных молекул

Использование линкерных молекул делает рестриктазно-лигазный метод рекомбинации фрагментов ДНК in vitro универсальным, поскольку исходные фрагменты можно получать самыми различными способами.

Практическое занятие №2

Страницы: 1 2 

Смотрите также

Особенности показателей вегетативной регуляции и функционального состояния у лиц с разным уровнем двигательной активности
Введение Актуальность темы исследования обусловлена интенсификацией процесса обучения в институте и ростом требований, предъявляемых студенту при поступлении в ВУЗ, современной систе ...

Эколого-физиологические особенности доминирующей водоросли литоральной зоны озера Байкал
Введение Макроводоросли являются одним из основных компонентов первичного звена экосистемы озера Байкал. Они оказывают влияние на кислородный режим в литорали, служат пищей и убежище ...

Физиология промежуточного мозга. Психофизиология речи и мыслительной деятельности
Введение Организм находится в непрерывном взаимодействии с окружающей его внешней средой. Это взаимодействие очень многогранно; оно обусловлено, с одной стороны, степенью сложности о ...

 
 




Copyright © 2013 - Все права защищены - www.biotheory.ru